HPLC過程中影響待測組分遷移的因素較多，同一組分在不同色譜條件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作條件下，同一組分在不同色譜柱上的保留值也可能有很大差別。因此，在高效液相色譜分析過程中，對定性分析方法提出了更高的要求。

　　（1）利用檢測器的選擇性進行定性將經(jīng)色譜柱分離后的樣品引入并聯(lián)或串聯(lián)的幾種不同檢測器，根據(jù)它們不同的檢測性能，視其出峰情況可以初步判別出未知化合物的具體類別。

　　（2）反相色譜中的“a、C”指數(shù)定性在以硅膠為固定相的反相色譜中，待測組分保留值與流動相組成關系式中的系數(shù)能夠反映待測組分的結構特征，因此可用于待測組分的輔助定性。

　　反相色譜中有機調節(jié)劑的濃度c與待測組分的分配比之間滿足對數(shù)線性關系，可表示為：

　　lnk=a+Cc（10.8）

　　式中，a、C分別為與流動相性質、固定相性質有關的常數(shù)。

　　基于式（10.8），盧佩章等列出了460種化合物在C18柱上不同條件下的a、C指數(shù)，并提出可不同柱系統(tǒng)、不同沖洗劑濃度組成時，a、C指數(shù)之間的換算方法。在相同的色譜條件下，如果樣品中某一組分的a、C指數(shù)與某已知標樣相同，即可認定兩者為同一種化合物。

　　此外，待測組分的分配比k作為一種結構型物性參量，其對數(shù)值與同系物碳數(shù)n之間存在良好的線性關系。

　　lnk=a+bm（10.9）

　　式中，a、b為常數(shù)。對于包含同系物組分的樣品，如果已知部分同系物在色譜圖中的位置，此時，可以根據(jù)碳數(shù)規(guī)律來推測其他同系物組分。